| 反應(yīng)種屬 | 人 |
| 檢測(cè)范圍 | 0.25—8 ng/mL |
| 物理性能 | 試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無(wú)沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝，無(wú)破損漏氣。 |
| 用途 | 定量檢測(cè)血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等樣本中人蓬亂蛋白Dsh同源物3 （DVL3）的濃度。 |
| 實(shí)驗(yàn)原理 | 本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。在預(yù)包被抗人蓬亂 蛋白Dsh同源物3（DVL3）抗體（固相抗體）的微孔酶標(biāo)板中，加入人蓬亂蛋白 Dsh 同源物3（DVL3）校準(zhǔn)品和待測(cè)樣本，再加入另一株HRP標(biāo)記的抗人蓬亂蛋 白Dsh同源物3（DVL3）抗體（酶標(biāo)抗體），經(jīng)過(guò)溫育與充分洗滌，去除未結(jié)合 的組分，在微孔板固相表面形成固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體的夾心復(fù)合物。加底 物A和B，底物在HRP催化下，產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，在終止液（2M 硫酸）作用下， 最終轉(zhuǎn)化為黃色，在酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)上測(cè)定吸光度（OD值），吸光度（OD值） 與待測(cè)樣品中人蓬亂蛋白Dsh同源物3（DVL3）的濃度正相關(guān)。擬合校準(zhǔn)品曲線， 可以計(jì)算出樣本中人蓬亂蛋白Dsh同源物3（DVL3）的濃度。 |
| 特異性 | 結(jié)構(gòu)類(lèi)似物無(wú)交叉 |
| 重復(fù)性 | 板內(nèi)變異系數(shù)均<10%，板間變異系數(shù)均<15%。 |
| 回收率 | 回收率在 85%-115%之間。 |
| 試驗(yàn)所需自備試驗(yàn)器材 | 1、酶標(biāo)儀（450nm） 2、精密移液器及一次性吸頭 3、蒸餾水 4、洗瓶或者自動(dòng)洗板機(jī) 5、37℃水浴鍋或恒溫箱 6、500ml 量筒 |
| 操作程序 | 所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫，標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品，建議做復(fù)孔。 1、按前面說(shuō)明書(shū)描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。 2、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。 3、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、0 值孔、空白孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL，0 值孔加樣本稀釋液 50μL，空白孔不加，樣本孔加待測(cè)樣本 50μL。 4、除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔、0 值孔和樣本孔，加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體 100μL。 5、用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光孵育 60min。 6、揭開(kāi)封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 20S，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù) 5 次。若使用自動(dòng)洗板機(jī)，請(qǐng)按洗板機(jī)操作程序進(jìn)行洗板，添加浸泡 30s 的程序，可以提高檢測(cè)的精度。洗板結(jié)束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應(yīng)板。 7、將底物 A 和 B 按 1:1 體積充分混合，所有孔中加入底物混合液 100μL。用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光孵育 15min。 8、所有孔加入終止液 50μL，在酶標(biāo)儀 450nm 波長(zhǎng)上讀取各孔吸光度（OD 值）。 |
| 注意事項(xiàng) | 1：如果試劑盒的組份需要再次使用，請(qǐng)確保上一次使用之后沒(méi)有被污染。 2：酶標(biāo)板單次未使用完，要謹(jǐn)記密封放到 2-8℃保存。 |
| 問(wèn)題分析 | ①問(wèn)題描述：標(biāo)準(zhǔn)曲線差 可能原因及相應(yīng)對(duì)策： 1.試劑盒平衡時(shí)間不夠——不低于 2 個(gè)小時(shí)的室溫平衡 2.吸取及洗滌不充分——充分的吸取及洗滌 3.移液不精確——檢查和校正移液器 ②問(wèn)題描述：精密度低 可能原因及相應(yīng)對(duì)策： 1.洗滌不充分——按說(shuō)明書(shū)要求充分洗滌和浸泡 2.混勻不充分和吸取試劑不足——充分混勻和吸取試劑 3.重復(fù)利用吸頭、容器和覆膜——使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的封板模 4.加樣不精確——檢查和校正移液器 ③問(wèn)題描述：O.D值低 可能原因及相應(yīng)對(duì)策： 1.每孔加的試劑量不精確——校正移液器，精確加入試劑 2.溫育時(shí)間不正確——保證充足的溫育時(shí)間 3.溫育溫度不正確——試劑要平衡至室溫并保證準(zhǔn)確的溫育溫度 4.酶標(biāo)記物或底物失效——通過(guò)混合酶標(biāo)記物和底物，顏色迅速顯現(xiàn)來(lái)檢查 5.沒(méi)有加入終止液——按照說(shuō)明書(shū)實(shí)驗(yàn)操作步驟加入終止液 6.超出讀數(shù)時(shí)間讀數(shù)——在說(shuō)明書(shū)推薦的讀數(shù)時(shí)間內(nèi)讀數(shù) ④問(wèn)題描述：樣本值 可能原因及相應(yīng)對(duì)策： 1.不正確的樣本儲(chǔ)存方式——正確儲(chǔ)存樣本，使用新鮮樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn) 2.不正確的樣本收集和處理方法——采取正確的樣本收集和處理方法 3.待測(cè)物質(zhì)在樣本中含量低——使用新鮮樣本，重復(fù)實(shí)驗(yàn) |
| 聲明 | 該試劑盒僅供研究使用，如將其用于臨床診斷或任何其他用途，我公司將不對(duì)因此產(chǎn)生的問(wèn)題負(fù)責(zé)，亦不承擔(dān)任何法律責(zé)任。 |
ELISA試劑盒常見(jiàn)問(wèn)題與解析
問(wèn)題表現(xiàn)：標(biāo)準(zhǔn)曲線的R²值低于0.99，甚至出現(xiàn)“S”形或雜亂無(wú)章的趨勢(shì)。
可能原因：
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋錯(cuò)誤（梯度沒(méi)做好或混勻不充分）。
標(biāo)準(zhǔn)品反復(fù)凍融導(dǎo)致降解。
酶標(biāo)板洗滌不徹底，孔間殘留液體影響吸光度。
解決方案：
標(biāo)準(zhǔn)品現(xiàn)配現(xiàn)用，避免多次凍融，稀釋時(shí)嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作。
確保洗滌步驟規(guī)范，洗板機(jī)噴嘴無(wú)堵塞，手工洗板時(shí)甩干并拍干。
如果曲線仍不理想，嘗試更換標(biāo)準(zhǔn)品或檢查酶標(biāo)儀波長(zhǎng)是否準(zhǔn)確。
問(wèn)題表現(xiàn)：樣本OD值接近空白孔，無(wú)法有效檢測(cè)目標(biāo)蛋白。
可能原因：
樣本中目標(biāo)蛋白濃度過(guò)低（低于檢測(cè)下限）。
抗體失效或孵育時(shí)間/溫度不足。
樣本處理不當(dāng)（如反復(fù)凍融、未加蛋白酶抑制劑）。
解決方案：濃縮樣本（超濾離心）或換用高靈敏度ELISA試劑盒。
檢查抗體有效期，確保孵育時(shí)間充足（可適當(dāng)延長(zhǎng)）。
新鮮樣本優(yōu)先，避免反復(fù)凍融，必要時(shí)添加保護(hù)劑。
問(wèn)題表現(xiàn)：空白孔或陰性對(duì)照OD值偏高，影響結(jié)果判讀。
可能原因：
封閉不充分（封閉液選擇不當(dāng)或時(shí)間不足）。
抗體交叉反應(yīng)或非特異性結(jié)合。
洗滌不徹底，殘留試劑導(dǎo)致假陽(yáng)性。
解決方案：
優(yōu)化封閉條件（常用BSA或脫脂奶粉，封閉時(shí)間可延長(zhǎng)至1-2小時(shí)）。
增加洗滌次數(shù)（如從3次增至5次），確保每孔洗滌液加滿。
更換特異性更高的抗體，或調(diào)整一抗/二抗稀釋比例。
問(wèn)題表現(xiàn)：同一批樣本檢測(cè)，孔間差異大，CV值超過(guò)20%。
可能原因：
加樣操作不一致（手法、速度差異）。
酶標(biāo)板邊緣效應(yīng)（邊緣孔蒸發(fā)快，溫濕度不均）。
試劑未平衡至室溫直接使用。
解決方案：
使用多通道移液器，統(tǒng)一加樣速度和角度。
孵育時(shí)覆蓋板蓋，避免邊緣孔干燥，可棄用邊緣孔作空白。
所有試劑使用前室溫平衡30分鐘，避免溫度差異影響反應(yīng)效率。
1.樣本處理：血清/血漿避免溶血，細(xì)胞裂解液需離心去除碎片，組織樣本勻漿充分。
1.
2.試劑保存：抗體、酶結(jié)合物等按說(shuō)明書(shū)要求保存（-20℃分裝避免反復(fù)凍融）。
3.儀器校準(zhǔn)：定期檢查移液器準(zhǔn)確性，酶標(biāo)儀做波長(zhǎng)和光路校準(zhǔn)。
4.對(duì)照設(shè)置：每板必設(shè)空白孔、陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照，監(jiān)控系統(tǒng)誤差。
如果實(shí)驗(yàn)結(jié)果異常，可以按以下步驟快速排查：
檢查試劑：是否過(guò)期？是否正確保存？
回顧操作：孵育時(shí)間、溫度、洗滌步驟是否規(guī)范？
分析數(shù)據(jù)：標(biāo)準(zhǔn)曲線是否正常？對(duì)照是否符合預(yù)期？
重復(fù)實(shí)驗(yàn)：換新試劑或調(diào)整條件后重試。
ELISA雖然操作簡(jiǎn)單，但“細(xì)節(jié)魔鬼”常常藏在加樣、洗滌、孵育這些基礎(chǔ)步驟里。遇到問(wèn)題時(shí)，耐心對(duì)照說(shuō)明書(shū)、排查關(guān)鍵環(huán)節(jié)，往往能事半功倍。如果反復(fù)失敗，不妨聯(lián)系試劑盒技術(shù)支持——畢竟，好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果=靠譜的試劑+規(guī)范的操作+一點(diǎn)點(diǎn)的運(yùn)氣！
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