| 反應種屬 | 小鼠 |
| 檢測范圍 | 0.25 ng/mL – 8 ng/mL |
| 物理性能 | 試劑盒的各液體組分應澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應真空包裝，無破損漏氣。 |
| 用途 | 用于檢測血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液等樣本中小鼠流腦 C 群多糖 lgG 抗體（ECMC-Ab）的濃度。 |
| 實驗原理 | 本試劑盒采用間接兩步法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。在預包被小鼠流腦 C 群多糖 lgG 抗體（ECMC-Ab）捕獲抗原（固相抗原）的微孔酶標板中，加入不同濃度校準品和待測樣本，經過溫育與充分洗滌，去除未結合的組分，再加入 HRP 標記的檢測抗體（酶標抗體），經過溫育與充分洗滌，去除未結合的組分，在微孔板固相表面形成固相抗原-抗體-酶標抗體的夾心復合物。加底物 A 和 B，底物在 HRP 催化下，產生藍色產物，在終止液作用下，最終轉化為黃色，在酶標儀上測定吸光度（OD 值），吸光度（OD 值）與待測樣品中待測抗體的濃度呈正相關。擬合校準品曲線，可以計算出樣本待測抗體的濃度。 |
| 特異性 | 本試劑盒識別天然和重組小鼠流腦 C 群多糖 lgG 抗體（ECMC-Ab），與結構類似物無交叉。 |
| 重復性 | 板內變異系數(shù)均<10%，板間變異系數(shù)均<15%。 |
| 回收率 | 回收率在 85%-115%之間。 |
| 試驗所需自備試驗器材 | 1、酶標儀（450nm） 2、精密移液器及一次性吸頭 3、蒸餾水 4、洗瓶或者自動洗板機 5、37℃水浴鍋或恒溫箱 6、500ml 量筒 |
| 操作程序 | 1、所有試劑和組分都先恢復到室溫，標準品、質控品和樣品，建議做復孔。 2、按前面試劑準備中描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。 3、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。 4、設置標準品孔、樣本孔和空白孔，標準品孔各加不同濃度的標準品 50μL，樣本孔加待測樣本 50μL，空白孔不加，用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 30min。 5、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干。如此重復 4 次（共洗板 5 次）。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進行洗板，添加浸泡 20s 的程序，可以提高檢測的精度。洗板結束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應板。 6、除空白孔外，標準品孔和樣本孔，加入辣根過氧化物酶標記的檢測抗體 100μL。 7、用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 30min。 8、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干。如此重復 4 次（共洗板 5 次）。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進行洗板，添加浸泡 20s 的程序，可以提高檢測的精度。洗板結束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應板。 9、將底物 A 和 B 按 1:1 體積充分混合，所有孔中加入底物混合液 100μL。用封板膜蓋住反應板，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 15min。 10、所有孔加入終止液 50μL，在酶標儀 450nm 波長下讀取各孔吸光度（OD 值）。 |
| 注意事項 | 1：如果試劑盒的組份需要再次使用，請確保上一次使用之后沒有被污染。 2：酶標板單次未使用完，要謹記密封放到 2-8℃保存。 |
| 問題分析 | ①問題描述：標準曲線差 可能原因及相應對策： 1.試劑盒平衡時間不夠——不低于 2 個小時的室溫平衡 2.吸取及洗滌不充分——充分的吸取及洗滌 3.移液不精確——檢查和校正移液器 ②問題描述：精密度低 可能原因及相應對策： 1.洗滌不充分——按說明書要求充分洗滌和浸泡 2.混勻不充分和吸取試劑不足——充分混勻和吸取試劑 3.重復利用吸頭、容器和覆膜——使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的封板模 4.加樣不精確——檢查和校正移液器 ③問題描述：O.D值低 可能原因及相應對策： 1.每孔加的試劑量不精確——校正移液器，精確加入試劑 2.溫育時間不正確——保證充足的溫育時間 3.溫育溫度不正確——試劑要平衡至室溫并保證準確的溫育溫度 4.酶標記物或底物失效——通過混合酶標記物和底物，顏色迅速顯現(xiàn)來檢查 5.沒有加入終止液——按照說明書實驗操作步驟加入終止液 6.超出讀數(shù)時間讀數(shù)——在說明書推薦的讀數(shù)時間內讀數(shù) ④問題描述：樣本值 可能原因及相應對策： 1.不正確的樣本儲存方式——正確儲存樣本，使用新鮮樣本進行實驗 2.不正確的樣本收集和處理方法——采取正確的樣本收集和處理方法 3.待測物質在樣本中含量低——使用新鮮樣本，重復實驗 |
| 聲明 | 該試劑盒僅供研究使用，如將其用于臨床診斷或任何其他用途，我公司將不對因此產生的問題負責，亦不承擔任何法律責任。 |
ELISA試劑盒常見問題與解析
問題表現(xiàn)：標準曲線的R²值低于0.99，甚至出現(xiàn)“S”形或雜亂無章的趨勢。
可能原因：
標準品稀釋錯誤（梯度沒做好或混勻不充分）。
標準品反復凍融導致降解。
酶標板洗滌不徹底，孔間殘留液體影響吸光度。
解決方案：
標準品現(xiàn)配現(xiàn)用，避免多次凍融，稀釋時嚴格按說明書操作。
確保洗滌步驟規(guī)范，洗板機噴嘴無堵塞，手工洗板時甩干并拍干。
如果曲線仍不理想，嘗試更換標準品或檢查酶標儀波長是否準確。
問題表現(xiàn)：樣本OD值接近空白孔，無法有效檢測目標蛋白。
可能原因：
樣本中目標蛋白濃度過低（低于檢測下限）。
抗體失效或孵育時間/溫度不足。
樣本處理不當（如反復凍融、未加蛋白酶抑制劑）。
解決方案：濃縮樣本（超濾離心）或換用高靈敏度ELISA試劑盒。
檢查抗體有效期，確保孵育時間充足（可適當延長）。
新鮮樣本優(yōu)先，避免反復凍融，必要時添加保護劑。
問題表現(xiàn)：空白孔或陰性對照OD值偏高，影響結果判讀。
可能原因：
封閉不充分（封閉液選擇不當或時間不足）。
抗體交叉反應或非特異性結合。
洗滌不徹底，殘留試劑導致假陽性。
解決方案：
優(yōu)化封閉條件（常用BSA或脫脂奶粉，封閉時間可延長至1-2小時）。
增加洗滌次數(shù)（如從3次增至5次），確保每孔洗滌液加滿。
更換特異性更高的抗體，或調整一抗/二抗稀釋比例。
問題表現(xiàn)：同一批樣本檢測，孔間差異大，CV值超過20%。
可能原因：
加樣操作不一致（手法、速度差異）。
酶標板邊緣效應（邊緣孔蒸發(fā)快，溫濕度不均）。
試劑未平衡至室溫直接使用。
解決方案：
使用多通道移液器，統(tǒng)一加樣速度和角度。
孵育時覆蓋板蓋，避免邊緣孔干燥，可棄用邊緣孔作空白。
所有試劑使用前室溫平衡30分鐘，避免溫度差異影響反應效率。
1.樣本處理：血清/血漿避免溶血，細胞裂解液需離心去除碎片，組織樣本勻漿充分。
1.
2.試劑保存：抗體、酶結合物等按說明書要求保存（-20℃分裝避免反復凍融）。
3.儀器校準：定期檢查移液器準確性，酶標儀做波長和光路校準。
4.對照設置：每板必設空白孔、陰性對照和陽性對照，監(jiān)控系統(tǒng)誤差。
如果實驗結果異常，可以按以下步驟快速排查：
檢查試劑：是否過期？是否正確保存？
回顧操作：孵育時間、溫度、洗滌步驟是否規(guī)范？
分析數(shù)據(jù)：標準曲線是否正常？對照是否符合預期？
重復實驗：換新試劑或調整條件后重試。
ELISA雖然操作簡單，但“細節(jié)魔鬼”常常藏在加樣、洗滌、孵育這些基礎步驟里。遇到問題時，耐心對照說明書、排查關鍵環(huán)節(jié)，往往能事半功倍。如果反復失敗，不妨聯(lián)系試劑盒技術支持——畢竟，好的實驗結果=靠譜的試劑+規(guī)范的操作+一點點的運氣！
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